蜂胶HPLC指纹图谱真伪鉴别初探 周 萍 章征天 胡福良 余秀珍

蜂胶的化学含有复杂，生物学活性广泛，是近年来国内外蜂产品研究与开发的热点。我国是蜂胶生产大国，近年来蜂胶产业发展迅猛，出现出口内销两旺的势头。在这样的背景下，由于利益的驱动，一些不法商贩见机制假售假，特别是以杨树胶冒充蜂胶的情况比较严重。如何提高蜂胶原料的质量，打击假冒伪劣蜂胶产品，是摆在我们面前严峻而紧迫的任务。

目前，我国的蜂胶质量标准有两个，分别是商业部的蜂胶标准(标准代号：SB/T10096-92)和农业部的无公害食品蜂胶标准(标准代号：NY/T5136-2002)。但这两个蜂胶标准均无法鉴别蜂胶与杨树胶，因为标准中规定的胶含量、总黄酮、氧化指标等项目，杨树胶均能达到。因此，建立真品蜂胶的HPLC指纹图谱，用以鉴别蜂胶真伪显得十分必要和迫切。

我们从蜂胶的功效含有——黄酮类化合物着手，测定了真品蜂胶、杨树胶和搀假蜂胶胶的HPLC指纹图谱，为蜂胶真伪的有效鉴别提供依据。

1 材料与方法

蜂胶：真品蜂胶，由杭州天地保健品有限公司实验蜂场提供。杨树胶，从市场上购入，经感官检验，初步确认。搀假蜂胶，按30%杨树胶与70%真品蜂胶混合而成。

试剂：甲醇，HPLC级；H3PO4，分析纯；乙醇，分析纯。

仪器：LC-10AT VP高效液相色谱仪(日本岛津)，UV检测器，N2000色谱工作站，METERLER电子分析天平(德国梅特勒公司)，超声波仪，双重蒸馏水器。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil RP-C18(4.6mm×150mm，3μm)

流动相：甲醇：0.4%H3PO4=65:35

流速：1.0ml/min

检测波长：360nm

进样量：2μL

1.2.2 供试品制备

取蜂胶5g，用20mL95%乙醇超声溶解，过滤，测定蜂胶固形物，称取该液适量，使其中含蜂胶固形物20mg，用流动相定容至50ml，混匀，用0.45μm滤膜过滤，上机分析。

2 结果

2.1 蜂胶HPLC指纹图谱的建立

蜂胶HPLC图谱以360nm波长检测色谱信息最为丰富，经多批次样品重复实验，归纳出19个峰，作为主要特征峰，组成其指纹图谱。这19个特征峰的峰号和保留时间见表1。

表1 蜂胶HPLC特征峰峰号和保留时间

峰号

相对保留时间/min

峰号

相对保留时间/min

1

4.51

11

9.16

2

5.02

12

9.47

3

5.27

13

10.57

4

5.72

14

11.44

5

6.99

15

12.26

6

7.26

16

13.67

7

7.56

17

15.67

8

7.86

18

17.51

9

8.17

19

18.47

10

8.76

2.2 真品蜂胶与杨树胶HPLC指纹图谱分析(图略)

杨树胶、真品蜂胶的指纹图谱见图1、图2。粗看2个图谱，其主要色谱峰相似度在90%以上，说明两者在主要含有的组成上非常接近，这也是两者普通方法难以区别的原因。但仔细观察可以发现，真品蜂胶含有19个特征峰中的18个特征峰，缺6号峰；杨树胶含有19个特征峰中的17个特征峰，缺7号和11号峰。通过对10个真品蜂胶和杨树胶的测定，均有以上特征。特别是7吨峰，其与6号、8号之间的分离度好，是真品蜂胶区别杨树胶的关键依据。

2.3 搀假蜂胶的辨别(图略)

搀假蜂胶的HPLC指纹图谱见图3。由图3可见，搀了杨树胶的搀假蜂胶，含有6号峰；而7号峰和11号峰的峰面积显著降低，可以参照真品蜂胶和杨树胶的指纹图谱进行判别。

各种蜂胶10个特征峰的相对峰面积RA(以蜂胶总峰面积为分母，样品中各色谱峰面积为分子，计算得到)见表2。

表2 各种蜂胶7个特征峰的相对峰面积(RA/%)

产品

名称

真品

蜂胶

杨树胶

搀假

蜂胶

产品

名称

真品

蜂胶

杨树胶

搀假

蜂胶

1

6.8

4.1

5.2

7

8.0

0.0

4.3

4

8.9

10.1

9.6

11

4.9

0.0

2.1

5

1.7

3.2

2.4

13

29.8

39.5

34.4

6

0.0

3.2

2.0

搀假蜂胶中，7号峰明显低于8号和9号峰，提示含量不足；而6号峰呈现，提示搀有杨树胶。

3 讨论

黄酮类化合物为蜂胶的主要功效含有，其种类及相对含量分布对于蜂胶的鉴别具有重要意义。根据黄酮类化合物的提取、测定方法，本文建立了蜂胶的HPLC指纹图谱，反映了蜂胶中黄酮类化合物的分布特征。通过比对真品蜂胶与杨树胶的HPLC指纹图谱，特别是6号、7号、11号特征蜂，可以明显地将两者区别开来。

中制剂指纹图谱已广泛应用于中制剂质量的控制和鉴别，并有多个标准用于指导生产和加工。蜂胶HPLC指纹图谱的建立和应用能有效地制止杨树胶的泛滥。为净化蜂胶市场提供有力的检测依据。本项研究还是初步的，更深入、全面的研究有待进一步展开。

资料来源：蜜蜂杂志2005年第8期