导读：为研究茶花粉黄酮对 α－葡萄糖苷酶的抑制作用，以茶花粉为原料，将提取、萃取及大孔吸附树脂处理得到的10 个组分分别进行黄酮含量及 α－葡萄糖苷酶抑制活性的测定。

研究表明天然黄酮类物质具有较强的 α－ 葡萄糖苷酶抑制活性，如 Kim［8］等发现漆树黄酮提取物浓度 50 μg /mL 时，对 α－葡萄糖苷酶的抑制作用高达98% ，Li［9］ 等的研究发现山楂叶黄酮提取物的 α－葡萄糖苷酶抑制活性极强( IC50 = 7.1 μg /mL) ，Yao［10］等发现毛菊苣黄酮提取物对 α－葡萄糖苷酶的抑制活性与阿卡波糖相当，然而，目前有关茶花粉黄酮抑制α－葡萄糖苷酶活性的研究还未见报道。因此，本文选用茶花粉为原料，研究茶花粉黄酮含量与 α－葡萄糖苷酶抑制活性的相关关系，并进一步分析茶花粉黄酮提取物对 α－ 葡萄糖苷酶抑制作用的动力学特征。

茶花粉 由北京市华有限公司提供，经粉碎后过 100 目筛，烘干备用。

磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水碳酸钠、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、对硝基苯酚、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇 国药集团，以上试剂均为分析纯; 芦丁、pNPG、α － 葡 萄 糖 苷 酶 美 国 Sigma公司。

HH－4 数显恒温水浴锅 上海精宏实验设备有限公司; LA120S 电子分析天平 赛多利斯科学仪器厂; FE－20 台式酸度测定仪 梅特勒－托利多仪器有限公司; WCJ－802 磁力加热搅拌器 国华电器有限公司; Water Aspirator 旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂; WFJ7200 紫外可见分光光度计 尤尼柯仪器有 限 公 司; Fluosear 荧 光 酶 标 仪 德 国 BMGLABTECH 公司。

茶花粉粗提物及萃取相的制备: 取干燥粉碎的茶花粉 1 kg，按料液比 1∶ 10( m∶ v)的比例添加无水乙醇，于 50 ℃水浴条件下浸提 6 h，提取 3 次，合并提取液，离心取上清，40 ℃ 减压浓缩成浸膏，得茶花粉乙醇提取物; 按 1∶ 5比例加入蒸馏水复溶茶花粉提取物浸膏，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每相萃取 4 次，将各相于 50 ℃ 下减压浓缩干燥，得石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和残余水相，均置于 4 ℃冷藏备用。

茶花粉黄酮的分离富集: 取上述黄酮含量最高的乙酸乙酯相，按 1 ∶ 5的比例加蒸馏水溶解，加入AB－8 型大孔吸附树脂，置于 30 ℃ 180 r/min 摇床中吸附 24 h，将吸附后的树脂装柱，依次用 10% 、30% 、50% 、70% 、90% 的乙醇洗脱，均洗脱 5 个柱体积，收集各洗 脱 组 分，50 ℃ 减 压 浓 缩 至 干，得 大 孔 树 脂10% 、30% 、50% 、70% 及 90% 乙醇洗脱相，放置于4 ℃冷藏备用。

称取芦丁 20.0 mg，用无水乙醇定容至 50 mL，得 0.4 mg /mL 芦丁母液，分别取0、1、2、3、4、5 mL 芦丁母液依次加入 0～5 号 25 mL 比色管中，蒸馏水稀释体积至 10 mL，摇匀，加入 1 mL5% 的亚硝酸钠，摇匀，静置 6 min; 加入 1 mL 10% 的硝酸铝，摇匀后静置 6 min，再加入 5 mL 1 mol /mL 的氢氧化钠，用无水乙醇定容至25 mL，摇匀，于510 nm下测定吸光值。以芦丁溶液浓度( μg /mL) 为横坐标x，吸光值为纵坐标 y，绘制标准曲线，测定的标准曲线为: y = 0.0102x－0.0019( Ｒ2 = 0.9997) 。

取 112 μLpH6.8 的磷酸盐缓冲液及 20 μL 0.2 U/mL 的 α－葡萄糖苷酶液于 96 孔板中，分别加入 8 μL 不同浓度的待测样品，37 ℃恒温 10 min 后加入 2.5 mmol /L 对硝基苯基－α－D－吡喃葡萄糖苷( pNPG) 20 μL，37 ℃ 恒温反应 15 min。再加入 0.2 mol /L 的 Na2CO3 水溶液80 μL，于 405 nm 波长下测 OD 值。以阿卡波糖为阳性对照。茶花粉提取物对 α－葡萄糖苷酶抑制率为:抑制率( % ) =［1－ ( A1 － A2 ) /( A3 － A4) ］× 100，式中，A1 为酶液 + 样品测得的吸光度值; A2 为磷酸盐缓冲液 + 样品测得的吸光度值; A3 为酶液 + 溶剂测得的吸光度值; A4 为磷酸盐缓冲液 + 溶剂测得的吸光度值，根据不同浓度下的抑制 率计算半抑制剂量( IC50 ) ［11］。