导读：为研究茶花粉黄酮对 α－葡萄糖苷酶的抑制作用，以茶花粉为原料，将提取、萃取及大孔吸附树脂处理得到的10 个组分分别进行黄酮含量及 α－葡萄糖苷酶抑制活性的测定。

研究由方法1.2.1 制备的茶花粉乙醇提取物、石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相、残余水相及大孔树脂不同浓度乙醇 ( 10% 、30% 、50% 、70% 、90% ) 洗脱相这 10 个组分的黄酮含量与 α－葡萄糖苷酶抑制活性之间的相关关系，采用 SPSS 19.0 分析软件进行分析。

固定底物 pNPG 浓度为 2.5 mmol /L，在不添加和添加茶花粉黄酮提取物( 0、0.5、1、1.5、2 mg /mL) 的情况下，测定不同 α－葡萄糖苷酶浓度( 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 U/mL) 下的酶促反应初速度，以反应初速度对酶浓度作图，判断可逆或不可逆抑制类型。

如果上述抑制类型为可逆抑制，固定 α－葡萄糖苷酶浓度为 0.2 U/mL，在不添加和添加茶花粉黄酮提取物( 0、0.5、1、1.5、2 mg /mL) 条件下，测定了不同pNPG 浓度下( 0.125、0.25、0.5、1、2 mmol /mL) 反应体系的反应速率，绘制 Lineweaver－Burk 曲线并判断其具体抑制类型。

实验数据通过SPSS19.0(IBM公司，美国) 分析软件进行处理，数据均采用平均值±标准偏差表示，方差分析采用邓肯法( p ＜ 0.05) ，相关性分析采用 pearson 法。

将茶花粉乙醇提取物、萃取相及残余水相分别浓缩成浸膏后，测定各浸膏的黄酮含量，结果见表 1。根据表 1 可知，茶花粉乙醇提取物经不同极性溶剂萃取后，各组分中的黄酮含量差异较大，其中乙酸乙酯相和正丁醇相中的黄酮含量分别为80.58 mg ＲE /g 和 57.57 mg ＲE /g，均显著高于其它组分( p ＜ 0.05) 。黄酮类化合物是在自然界中分布非常广泛的一类天然产物［12］，本文茶花粉中黄酮经萃取后主要在乙酸乙酯及正丁醇中富集，即茶花粉黄酮的极性主要与乙酸乙酯及正丁醇相似。孙岩等［13］用不同溶剂萃取油菜蜂花粉中的黄酮发现，油菜蜂花粉黄酮同样主要富集在正丁醇相和乙酸乙酯相中。

用无水乙醇将上述样品均复溶为 5 mg /mL 的溶液，分别测定各溶液对 α－ 葡萄糖苷酶的抑制活性( 表 1) 。结果显示，各样品的活性大小顺序为: 乙酸乙酯萃取相 ＞ 正丁醇萃取相 = 乙醇提取物 ＞ 水相 ＞石油醚相( p ＜ 0.05) ，即茶花粉乙醇提取物经萃取后，乙酸乙酯相的活性提高显著，但正丁醇相的活性与乙醇提取物相比没有显著性差异，而残余水相及石油醚相的活性显著低于乙醇提取物( p ＜ 0.05) 。由于乙酸乙酯相的黄酮含量及 α－葡萄糖苷酶抑制活性均高于其他组分，本文进一步对乙酸乙酯相进行大孔吸附树脂层析，并研究大孔树脂分离组分的黄酮含量及 α－葡萄糖苷酶抑制活性。